د مالیکولي کشف میتودونه د دې وړتیا لري چې په نمونو کې موندل شوي د ټریس مقدارونو د لوړولو له لارې د نیوکلیک اسید لوی مقدار تولید کړي. پداسې حال کې چې دا د حساس کشف فعالولو لپاره ګټور دی، دا د لابراتوار چاپیریال کې د لوړولو ایروسولونو د خپریدو له لارې د ککړتیا امکان هم معرفي کوي. کله چې تجربې ترسره کوئ، د ریجنټونو، لابراتوار تجهیزاتو او بینچ ځای د ککړتیا څخه مخنیوي لپاره اقدامات ترسره کیدی شي، ځکه چې دا ډول ککړتیا ممکن غلط مثبت (یا غلط منفي) پایلې رامینځته کړي.
د ککړتیا د احتمال کمولو لپاره، باید تل د لابراتوار ښه تمرینونه ترسره شي. په ځانګړې توګه، د لاندې ټکو په اړه باید احتیاطي تدابیر ونیول شي:
۱. د ریجنټونو اداره کول
۲. د کاري ځای او تجهیزاتو تنظیم کول
۳. د ټاکل شوي مالیکولي ځای لپاره د کارولو او پاکولو مشوره
۴. د مالیکولي بیولوژي عمومي مشوره
۵. داخلي کنټرولونه
۶. کتابچه
۱. د ریجنټونو اداره کول
د ایروسولونو د تولید څخه د مخنیوي لپاره د خلاصیدو دمخه د سینټرفیوج ریجنټ ټیوبونو لنډیز. د ډیری کنګل کیدو او د ماسټر سټاکونو د ککړتیا څخه مخنیوي لپاره د ریجنټونو جلا کول. په روښانه ډول د ټولو ریجنټونو او عکس العمل ټیوبونو لیبل او نیټه ولیکئ او د ریجنټونو لاټ او د بیچ شمیرو لاګونه وساتئ چې په ټولو تجربو کې کارول کیږي. د فلټر لارښوونو په کارولو سره ټول ریجنټونه او نمونې پایپټ کړئ. د پیرودلو دمخه، دا مشوره ورکول کیږي چې د تولید کونکي سره تایید کړئ چې د فلټر لارښوونې د کارول شوي پایپټ برانډ سره سمون لري.
۲. د کاري ځای او تجهیزاتو تنظیم کول
کاري ځای باید تنظیم شي ترڅو ډاډ ترلاسه شي چې د کار جریان په یوه لوري کې ترسره کیږي، د پاکو سیمو (PCR څخه مخکې) څخه تر ناپاکو سیمو (PCR وروسته) پورې. لاندې عمومي احتیاطي تدابیر به د ککړتیا چانس کمولو کې مرسته وکړي. جلا ټاکل شوي خونې ولرئ، یا لږترلږه په فزیکي توګه جلا ساحې ولرئ، د دې لپاره: ماسټر مکس چمتو کول، د نیوکلیک اسید استخراج او د DNA ټیمپلیټ اضافه کول، د پراخ شوي محصول لوړول او اداره کول، او د محصول تحلیل، د بیلګې په توګه جیل الیکټروفوریسس.
په ځینو ترتیباتو کې، د څلورو جلا خونو درلودل ستونزمن دي. یو ممکنه مګر لږ مطلوب انتخاب دا دی چې ماسټر مکس چمتو کول په یوه کانټینټ ساحه کې ترسره شي، د بیلګې په توګه د لامینر جریان کابینه. د نیست شوي PCR امپلیفیکیشن په حالت کې، د دوهم پړاو تعامل لپاره د ماسټر مکس چمتو کول باید د ماسټر مکس چمتو کولو لپاره په 'پاک' ساحه کې چمتو شي، مګر د لومړني PCR محصول سره واکسین باید د امپلیفیکیشن خونه کې ترسره شي، او که امکان ولري په یوه وقف شوي کانټینټ ساحه کې (د بیلګې په توګه د لامینر جریان کابینه).
هره خونه/سیمه د روښانه لیبل شوي پایپټونو، فلټر لارښوونو، ټیوب ریکونو، ورټیکسونو، سنټرفیوجونو (که اړونده وي)، قلمونو، عمومي لابراتوار ریجنټونو، لابراتوار کوټونو او د دستکشو بکسونو جلا سیټ ته اړتیا لري چې په خپلو اړوندو کاري ځایونو کې پاتې شي. لاسونه باید ومینځل شي او دستکشې او لابراتوار کوټونه د ټاکل شوي ساحو ترمنځ د حرکت کولو پرمهال بدل شي. ریجنټونه او تجهیزات باید له ناپاکې سیمې څخه پاکې سیمې ته ونه لیږدول شي. که چیرې یوه سخته قضیه رامینځته شي چیرې چې ریجنټ یا د تجهیزاتو ټوټه بیرته حرکت ته اړتیا لري، نو دا باید لومړی د 10٪ سوډیم هایپوکلورایټ سره پاک شي، وروسته د تعقیم اوبو سره پاک شي.
یادښت
د ۱۰٪ سوډیم هایپوکلورایټ محلول باید هره ورځ تازه جوړ شي. کله چې د پاکولو لپاره کارول کیږي، باید لږترلږه ۱۰ دقیقې د تماس وخت مراعات شي.
په بدیل سره، په سوداګریزه توګه شتون لرونکي محصولات چې د DNA ویجاړونکي سطحې پاکوونکي په توګه تایید شوي دي کارول کیدی شي که چیرې د ځایی خوندیتوب سپارښتنې د سوډیم هایپوکلورایټ کارولو ته اجازه ورنکړي یا که سوډیم هایپوکلورایټ د تجهیزاتو فلزي برخو پاکولو لپاره مناسب نه وي.
په مثالي توګه، کارمندان باید د یو اړخیز کاري جریان اخلاقو ته غاړه کیږدي او په ورته ورځ د ناپاکو سیمو (د PCR وروسته) څخه بیرته پاکو سیمو (د PCR دمخه) ته لاړ نشي. په هرصورت، ممکن داسې وختونه وي کله چې دا ناگزیر وي. کله چې داسې موقع رامینځته شي، کارمندان باید پاملرنه وکړي چې لاسونه په بشپړه توګه ومینځي، دستکشې بدل کړي، ټاکل شوي لابراتوار کوټ وکاروي او هیڅ هغه تجهیزات معرفي نه کړي چې دوی به یې بیا له خونې څخه وباسي، لکه د لابراتوار کتابونه. د مالیکولي میتودونو په اړه د کارمندانو په روزنه کې باید د کنټرول دا ډول اقداماتو باندې ټینګار وشي.
د کارولو وروسته، د بنچ ځایونه باید د 10٪ سوډیم هایپوکلورایټ (وروسته د جراثیمي اوبو سره پاک شي ترڅو پاتې بلیچ لرې شي)، 70٪ ایتانول، یا د DNA ویجاړونکي تایید شوي سوداګریز شتون لرونکي پاکوونکي سره پاک شي. په مثالي توګه، د الټرا وایلیټ (UV) څراغونه باید نصب شي ترڅو د وړانګو له لارې پاک شي. په هرصورت، د UV څراغونو کارول باید تړلو کاري ساحو پورې محدود وي، د بیلګې په توګه د خوندیتوب کابینې، ترڅو د لابراتوار کارمندانو د UV افشا کول محدود کړي. مهرباني وکړئ د UV څراغ پاملرنې، هوا ورکولو او پاکولو لپاره د جوړونکي لارښوونو ته غاړه کیږدئ ترڅو ډاډ ترلاسه شي چې څراغونه اغیزمن پاتې کیږي.
که چیرې د سوډیم هایپوکلورایټ پر ځای ۷۰٪ ایتانول وکارول شي، نو د پاکولو بشپړولو لپاره به د UV رڼا سره شعاع ته اړتیا وي.
ورټیکس او سنټرفیوج د سوډیم هایپوکلورایټ سره مه پاکوئ؛ پرځای یې، د 70٪ ایتانول سره پاک کړئ او د UV رڼا سره مخ شئ، یا د سوداګریز DNA ویجاړونکي پاکوونکي څخه کار واخلئ. د توییدو لپاره، د نورو پاکولو مشورې لپاره د تولیدونکي سره وګورئ. که چیرې د تولیدونکي لارښوونې اجازه ورکړي، پایپټونه باید په منظم ډول د آټوکلیو لخوا تعقیم شي. که چیرې پایپټونه اتوماتیک نه شي کیدی، نو دا باید کافي وي چې دوی د 10٪ سوډیم هایپوکلورایټ سره پاک کړئ (وروسته د تعقیم اوبو سره بشپړ پاک کړئ) یا د سوداګریز DNA ویجاړونکي پاکوونکي سره چې د UV سره مخ کیږي.
د لوړ سلنې سوډیم هایپوکلورایټ سره پاکول ممکن په پای کې د پایپټ پلاستیکونو او فلزاتو ته زیان ورسوي که چیرې په منظم ډول ترسره شي؛ لومړی د تولید کونکي سپارښتنې وګورئ. ټول تجهیزات باید په منظم ډول د تولید کونکي لخوا وړاندیز شوي مهالویش سره سم کیلیبریټ شي. یو ټاکل شوی کس باید د دې ډاډ ترلاسه کولو مسؤلیت ولري چې د کیلیبریشن مهالویش تعقیب شوی، تفصيلي لاګونه ساتل شوي، او د خدماتو لیبلونه په تجهیزاتو کې په روښانه ډول ښودل شوي.
۳. د ټاکل شوي مالیکولي ځای لپاره د کارولو او پاکولو مشوره
د PCR څخه مخکې: د ریجنټ الیکوټینګ / ماسټر مکس چمتووالی: دا باید د مالیکولي تجربو چمتو کولو لپاره کارول شوي ټولو ځایونو څخه پاک وي او په مثالي توګه باید د UV رڼا سره سمبال شوي ټاکل شوي لامینر جریان کابینه وي. نمونې، استخراج شوي نیوکلیک اسید او امپلیفایډ PCR محصولات باید پدې ساحه کې ونه کارول شي. امپلیفایډ ریجنټونه باید په فریزر (یا یخچال، د جوړونکي سپارښتنو سره سم) کې په ورته ټاکل شوي ځای کې وساتل شي، په مثالي توګه د لامینر جریان کابینه یا د PCR څخه مخکې ساحې ته نږدې. دستکشې باید هر ځل د PCR څخه مخکې ساحې یا لامینر جریان کابینه ته د ننوتلو پرمهال بدل شي.
د PCR څخه مخکې ساحه یا د لامینار جریان کابینه باید د کارولو دمخه او وروسته په لاندې ډول پاکه شي: په کابینه کې ټول توکي، د بیلګې په توګه پایپټونه، د ټیپ بکسونه، وورټیکس، سنټرفیوج، د ټیوب ریکونه، قلمونه، او نور د 70٪ ایتانول یا سوداګریز DNA ویجاړونکي پاکوونکي سره پاک کړئ، او وچیدو ته یې پریږدئ. د تړل شوي کاري ساحې په حالت کې، د بیلګې په توګه د لامینار جریان کابینه، هود د 30 دقیقو لپاره د UV رڼا ته ښکاره کړئ.
یادښت
ریجنټونه د UV رڼا ته مه ښکاره کوئ؛ یوازې هغه وخت کابینې ته یې واچوئ کله چې پاک وي. که چیرې د ریورس ټرانسکرپشن PCR ترسره کوئ، نو دا ممکن د سطحو او تجهیزاتو پاکول هم ګټور وي چې د تماس په وخت کې RNases ماتوي. دا ممکن د RNA د انزایم تخریب څخه د غلط منفي پایلو مخنیوي کې مرسته وکړي. د پاکولو وروسته او د ماسټر مکس چمتو کولو دمخه، دستکشې باید یو ځل بیا بدل شي، او بیا کابینې د کارولو لپاره چمتو وي.
د PCR څخه مخکې: د نیوکلیک اسید استخراج/د ټیمپلیټ اضافه کول:
نیوکلیک اسید باید په دوهم ټاکل شوي ساحه کې استخراج او اداره شي، د پایپټونو، فلټر لارښوونو، ټیوب ریکونو، تازه دستکشو، لابراتوار کوټونو او نورو تجهیزاتو جلا سیټ په کارولو سره. دا ساحه د ماسټر مکس ټیوبونو یا پلیټونو ته د ټیمپلیټ، کنټرولونو او رجحان لیکونو اضافه کولو لپاره هم ده. د استخراج شوي نیوکلیک اسید نمونو د ککړتیا څخه مخنیوي لپاره چې تحلیل کیږي، سپارښتنه کیږي چې د مثبت کنټرولونو یا معیارونو اداره کولو دمخه دستکشې بدل کړئ او د پایپټونو جلا سیټ وکاروئ. د PCR ریجنټونه او امپلیفایډ محصولات باید پدې ساحه کې پایپټ نه شي. نمونې باید په ورته ساحه کې په ټاکل شوي یخچالونو یا فریزرونو کې زیرمه شي. د نمونې کاري ځای باید د ماسټر مکس ځای په څیر پاک شي.
د PCR وروسته: د امپلیفایډ شوي محصول پراخول او اداره کول
دا ټاکل شوی ځای د امپلیفیکیشن وروسته پروسو لپاره دی او باید په فزیکي توګه د PCR دمخه ساحو څخه جلا وي. دا معمولا ترموسایکلرونه او ریښتیني وخت پلیټ فارمونه لري، او په مثالي توګه باید د لامینر جریان کابینه ولري ترڅو د دوهم پړاو غبرګون ته د PCR پړاو 1 محصول اضافه کړي، که چیرې نیست شوي PCR ترسره کیږي. د PCR ریجنټونه او استخراج شوي نیوکلیک اسید باید پدې ساحه کې ونه کارول شي ځکه چې د ککړتیا خطر لوړ دی. دا ساحه باید د دستکشو، لابراتوار کوټونو، پلیټ او ټیوب ریکونو، پایپټونو، فلټر لارښوونو، بنونو او نورو تجهیزاتو جلا سیټ ولري. ټیوبونه باید د خلاصیدو دمخه سینټرفیوج شي. د نمونې کاري ځای باید د ماسټر مکس ځای په څیر پاک شي.
د PCR وروسته: د محصول تحلیل
دا خونه د محصول کشف کولو تجهیزاتو لپاره ده، د بیلګې په توګه د جیل الیکروفوریسس ټانکونه، د بریښنا کڅوړې، د UV ټرانسیلومینیټر او د جیل اسنادو سیسټم. دا ساحه باید د دستکشو، لابراتوار کوټونو، پلیټ او ټیوب ریکونو، پایپټونو، د فلټر لارښوونو، ډنډونو او نورو تجهیزاتو جلا سیټونه ولري. د بار کولو رنګ، مالیکولر مارکر او اګاروز جیل، او بفر اجزاو پرته نور هیڅ ریجنټونه دې سیمې ته نشي راوړل کیدی. د نمونې کاري ځای باید د ماسټر مکس ځای په څیر پاک شي.
مهمه یادونه
په مثالي توګه، که چیرې د PCR وروسته خونو کې کار دمخه ترسره شوی وي، نو باید په هماغه ورځ د PCR دمخه خونو ته ننوځي. که دا په بشپړ ډول ناگزیر وي، ډاډ ترلاسه کړئ چې لاسونه لومړی په ښه توګه مینځل شوي او په خونو کې ځانګړي لابراتوار کوټونه اغوستل شوي دي. د لابراتوار کتابونه او کاغذونه باید د PCR دمخه خونو ته ونه وړل شي که چیرې دوی د PCR وروسته خونو کې کارول شوي وي؛ که اړتیا وي، د پروتوکولونو / نمونې IDs او نورو نقلونو چاپ آوټونه واخلئ.
۴. د مالیکولي بیولوژي عمومي مشوره
د معاینې د مخنیوي څخه د مخنیوي لپاره د پوډر څخه پاک دستکشې وکاروئ. د پایپ کولو سمه تخنیک د ککړتیا کمولو لپاره خورا مهم دی. د غلط پایپ کولو له امله د مایعاتو توزیع او د ایروسولونو رامینځته کیدو پرمهال د سپری کیدو لامل کیدی شي. د سم پایپ کولو لپاره ښه تمرین په لاندې لینکونو کې موندل کیدی شي: د پایپ کولو لپاره د ګیلسن لارښود، د اناخیم پایپ کولو تخنیک ویډیوګانې، د سینټرفیوج ټیوبونه د خلاصیدو دمخه، او د سپری کیدو څخه مخنیوي لپاره یې په احتیاط سره خلاص کړئ. د کارولو وروسته سمدلاسه ټیوبونه وتړئ ترڅو د ککړونکو معرفي کیدو څخه مخنیوی وشي.
کله چې ډیری تعاملات ترسره کوئ، یو ماسټر مکس چمتو کړئ چې عام ریجنټونه ولري (د بیلګې په توګه اوبه، dNTPs، بفر، پریمرونه او انزایم) ترڅو د ریجنټ لیږد شمیر کم کړي او د ککړتیا ګواښ کم کړي. سپارښتنه کیږي چې ماسټر مکس په یخ یا سړه بلاک کې تنظیم شي. د هاټ سټارټ انزایم کارول ممکن د غیر مشخص محصولاتو تولید کمولو کې مرسته وکړي. د تخریب څخه مخنیوي لپاره د فلوروسینټ پروبونو لرونکي ریجنټونه د رڼا څخه خوندي کړئ.
۵. داخلي کنټرولونه
په ټولو تعاملاتو کې د بې نمونې کنټرول سره ښه مشخص شوي، تایید شوي مثبت او منفي کنټرولونه، او د کمیتي تعاملاتو لپاره د څو ټکو ټایټریټ شوي رجحان لاین شامل کړئ. مثبت کنټرول باید دومره قوي نه وي چې د ککړتیا خطر رامینځته کړي. د نیوکلیک اسید استخراج ترسره کولو پرمهال مثبت او منفي استخراج کنټرولونه شامل کړئ.
سپارښتنه کیږي چې په هره سیمه کې واضح لارښوونې خپرې شي ترڅو کاروونکي د چلند له قواعدو څخه خبر وي. هغه تشخیصي لابراتوارونه چې په کلینیکي نمونو کې د DNA یا RNA خورا ټیټه کچه کشف کوي ممکن وغواړي چې د PCR دمخه خونو کې د هوا د کنټرول جلا سیسټمونو او د PCR وروسته خونو کې د هوا د فشار لږ منفي سره د اضافي امنیتي تدابیر غوره کړي.
په پای کې، د کیفیت تضمین (QA) پلان جوړول ګټور دي. په دې پلان کې باید د ریجنټ ماسټر سټاکونو او کاري سټاکونو لیستونه، د کټونو او ریجنټونو ذخیره کولو قواعد، د کنټرول پایلو راپور ورکول، د کارمندانو روزنیز پروګرامونه، د ستونزو حل کولو الګوریتمونه، او د اړتیا په وخت کې د اصلاح اقدامات شامل وي.
۶. کتابچه
اسلان اې، کینزلمان جي، ډریلین ای، انانیوا ټي، لیوانډر جي. دریم فصل: د qPCR لابراتوار جوړول. د USEPA qPCR میتود 1611 په کارولو سره د تفریحي اوبو ازموینې لپاره د لارښود سند. لانسینګ - د میشیګان ایالت پوهنتون.
د انګلستان عامه روغتیا، NHS. د مایکروبیولوژی تحقیقاتو لپاره د انګلستان معیارونه: د مالیکولر امپلیفیکیشن ازموینې ترسره کولو پرمهال ښه لابراتوار تمرین). د کیفیت لارښود. 2013;4(4):1–15.
میفلین ټي. د PCR لابراتوار جوړول. د کولډ سپرینګ هارب پروتوک. ۲۰۰۷؛۷.
شروډر ایس ۲۰۱۳. د سنټرفیوجونو معمول ساتنه: د سنټرفیوجونو، روټرونو او اډاپټرونو پاکول، ساتنه او غیر منتن کول (سپین کاغذ شمیره ۱۴). هامبورګ: ایپینډورف؛ ۲۰۱۳.
ویانا آر وي، والیس سي ایل. د تشخیصي لابراتوارونو کې کارول شوي مالیکولي پر بنسټ ازموینو لپاره ښه کلینیکي لابراتوار تمرین (GCLP)، په: اکیار I، مدیر. د کیفیت کنټرول پراخه طیف. ریجیکا، کروشیا: انټیک؛ ۲۰۱۱: ۲۹-۵۲.
د پوسټ وخت: جولای-۱۶-۲۰۲۰
