Молекул илрүүлэх аргууд нь дээжээс олдсон ул мөрийн хэмжээг нэмэгдүүлэх замаар их хэмжээний нуклейн хүчил үүсгэх чадвартай.Хэдийгээр энэ нь мэдрэмтгий илрүүлэх боломжийг олгоход ашигтай боловч лабораторийн орчинд олшруулагч аэрозоль тархах замаар бохирдох боломжийг бий болгодог.Туршилт хийхдээ урвалж бодис, лабораторийн тоног төхөөрөмж, вандан сандлын талбайг бохирдуулахгүй байх арга хэмжээ авч болно, учир нь ийм бохирдол нь хуурамч эерэг (эсвэл худал-сөрөг) үр дүнг үүсгэж болзошгүй юм.

Бохирдуулах магадлалыг бууруулахад туслахын тулд лабораторийн сайн туршлагыг үргэлж дагаж мөрдөх ёстой.Ялангуяа дараахь зүйлээс урьдчилан сэргийлэх арга хэмжээ авах шаардлагатай.

1. Урвалжтай харьцах
2. Ажлын байр, тоног төхөөрөмжийн зохион байгуулалт
3. Зориулалтын молекулын орон зайд ашиглах, цэвэрлэх зөвлөгөө
4. Молекул биологийн ерөнхий зөвлөгөө
5. Дотоод хяналт
6. Ном зүй

1. Урвалжтай харьцах

Аэрозоль үүсэхээс зайлсхийхийн тулд урвалжийн хоолойг нээхээс өмнө богино хугацаанд центрифуг хийнэ.Олон удаа хөлдөж гэсэх, үндсэн нөөцийг бохирдуулахгүйн тулд урвалжуудыг хуваана.Бүх урвалж болон урвалын хоолойд шошго, огноог тодорхой бичиж, бүх туршилтанд ашигласан урвалжийн багц, багцын дугаарыг хөтөлнө.Шүүлтүүрийн зөвлөмжийг ашиглан бүх урвалж болон дээжийг пипеткээр хийнэ.Худалдан авахаасаа өмнө шүүлтүүрийн үзүүр нь хэрэглэх пипеткийн брэндтэй тохирч байгаа эсэхийг үйлдвэрлэгчээс баталгаажуулахыг зөвлөж байна.

2. Ажлын байр, тоног төхөөрөмжийн зохион байгуулалт

Ажлын байрыг цэвэр талбайгаас (ПГУ-ын өмнөх) бохир газар (ПГУ-ын дараах) хүртэл ажлын урсгалыг нэг чиглэлд явуулахын тулд зохион байгуулна.Дараах ерөнхий урьдчилан сэргийлэх арга хэмжээ нь бохирдох магадлалыг бууруулахад тусална.Мастер хольц бэлтгэх, нуклейн хүчлийн олборлолт ба ДНХ-ийн загвар нэмэх, олшруулсан бүтээгдэхүүнийг олшруулах, боловсруулах, гель электрофорез гэх мэт бүтээгдэхүүний шинжилгээнд зориулж тусдаа зориулалтын өрөөнүүд эсвэл бие махбодийн хувьд хамгийн багадаа тусдаа газартай байх.

Зарим нөхцөлд 4 тусдаа өрөөтэй байх нь хэцүү байдаг.Боломжтой, гэхдээ хүсээгүй сонголт бол хольцын бэлтгэлийг битүүмжлэх хэсэгт, жишээлбэл, ламинар урсгалтай шүүгээнд хийх явдал юм.Үүлэн ПГУ-ын олшруулалтын хувьд хоёр дахь ээлжийн урвалд зориулсан мастер хольцын бэлдмэлийг мастер хольц бэлтгэх "цэвэр" талбайд бэлтгэсэн байх ёстой, харин ПГУ-ын анхдагч бүтээгдэхүүнээр тарилгыг олшруулах өрөөнд хийх бөгөөд боломжтой бол. зориулалтын тусгаарлах хэсэгт (жишээ нь, ламинар урсгалын кабинет).

Өрөө / талбай бүрт тодорхой шошготой пипетк, шүүлтүүрийн үзүүр, хоолойн тавиур, эргүүлэг, центрифуг (хэрэв холбогдох бол), үзэг, лабораторийн ерөнхий урвалж, лабораторийн цув, бээлийний хайрцаг зэргийг тус тусын ажлын байрандаа үлдээх шаардлагатай.Зориулалтын талбайн хооронд шилжихдээ гараа угааж, бээлий, лабораторийн дээлийг солих шаардлагатай.Урвалж, тоног төхөөрөмжийг бохир газраас цэвэр газар нүүлгэж болохгүй.Урвалж эсвэл тоног төхөөрөмжийг хойш нь хөдөлгөх онцгой тохиолдол гарвал эхлээд 10% натрийн гипохлоритоор ариутгаж, дараа нь ариутгасан усаар арчина.

Анхаарна уу

10%-ийн натрийн гипохлоритын уусмалыг өдөр бүр шинэхэн бэлтгэсэн байх ёстой.Халдваргүйжүүлэлтэд ашиглахдаа хамгийн багадаа 10 минутын контакттай байх ёстой.
Түүнчлэн, орон нутгийн аюулгүй байдлын зөвлөмжөөр натрийн гипохлорит хэрэглэхийг зөвшөөрдөггүй эсвэл натрийн гипохлорит нь төхөөрөмжийн металл хэсгүүдийг халдваргүйжүүлэхэд тохиромжгүй тохиолдолд ДНХ-г устгадаг гадаргуугийн ариутгагч гэж баталгаажсан, худалдаанд гарсан бүтээгдэхүүнийг ашиглаж болно.

Ажилтнууд нэг чиглэлтэй ажлын урсгалын ёс зүйг дагаж мөрдөж, бохир газраас (ПГУ-ын дараах) нэг өдөр цэвэр газар руу (ПГУ-ын өмнөх) буцаж очихгүй байх ёстой.Гэсэн хэдий ч үүнээс зайлсхийх боломжгүй тохиолдол байж болно.Ийм нөхцөл байдал үүссэн тохиолдолд ажилтнууд гараа сайтар угааж, бээлий солих, зориулалтын лабораторийн дээлийг ашиглах, лабораторийн ном гэх мэт өрөөнөөс гаргахыг хүсэх ямар ч хэрэгслийг дахин нэвтрүүлэхгүй байх ёстой.Ажилтныг молекулын аргын талаар сургахад ийм хяналтын арга хэмжээг онцлон анхаарах хэрэгтэй.

Хэрэглэсний дараа вандан сандлын талбайг 10% натрийн гипохлорит (араас нь цайруулагчийн үлдэгдэлийг арилгахын тулд ариутгасан усаар), 70% этилийн спирт эсвэл ДНХ-г устгах баталгаатай ариутгагч бодисоор цэвэрлэнэ.Хамгийн тохиромжтой нь хэт ягаан туяаны (хэт ягаан туяаны) чийдэнг цацрагаар халдваргүйжүүлэх боломжийг олгодог.Гэсэн хэдий ч лабораторийн ажилтнуудын хэт ягаан туяаны нөлөөллийг хязгаарлахын тулд хэт ягаан туяаны чийдэнг хаалттай ажлын хэсэгт, тухайлбал аюулгүйн шүүгээнд ашиглах хэрэгтэй.Хэт ягаан туяаны чийдэнг арчлах, агааржуулах, цэвэрлэх талаар үйлдвэрлэгчийн зааврыг дагаж мөрдөөрэй.

Хэрэв натрийн гипохлоритын оронд 70% этилийн спирт хэрэглэж байгаа бол халдваргүйжүүлэлтийг дуусгахын тулд хэт ягаан туяагаар цацраг туяа хийх шаардлагатай болно.
Натрийн гипохлоритоор эргүүлэг болон центрифугийг цэвэрлэж болохгүй;оронд нь 70%-ийн этанолоор арчиж, хэт ягаан туяанд оруулах, эсвэл ДНХ-г устгах арилжааны бодис хэрэглээрэй.Асгарсан тохиолдолд үйлдвэрлэгчээс нэмэлт цэвэрлэгээ хийх талаар зөвлөгөө аваарай.Хэрэв үйлдвэрлэгчийн зааврыг зөвшөөрвөл пипеткийг автоклавт тогтмол ариутгана.Хэрэв пипеткийг автоклавлах боломжгүй бол тэдгээрийг 10% натрийн гипохлорит (ариутгасан усаар сайтар арчиж арчих) эсвэл ДНХ-г устгадаг арилжааны бодисоор, дараа нь хэт ягаан туяагаар цэвэрлэхэд хангалттай.

Өндөр хувьтай натрийн гипохлоритоор цэвэрлэх нь пипеткийн хуванцар болон металлыг байнга гэмтээж болзошгүй;эхлээд үйлдвэрлэгчийн зөвлөмжийг шалгана уу.Бүх тоног төхөөрөмжийг үйлдвэрлэгчээс санал болгосон хуваарийн дагуу тогтмол тохируулж байх шаардлагатай.Тохиромжтой хүн шалгалт тохируулгын хуваарийг дагаж мөрдөж, нарийвчилсан бүртгэл хөтөлж, тоног төхөөрөмж дээр үйлчилгээний шошгыг тодорхой харуулсан байх ёстой.

3. Зориулалтын молекулын орон зайд ашиглах, цэвэрлэх зөвлөгөө

Урьдчилан ПГУ: Урвалж хуваах / мастер хольц бэлтгэх: Энэ нь молекулын туршилтыг бэлтгэхэд ашигладаг бүх зайнаас хамгийн цэвэр байх ёстой бөгөөд хэт ягаан туяагаар тоноглогдсон ламинар урсгалтай кабинет байх ёстой.Дээж, гаргаж авсан нуклейн хүчил болон олшруулсан ПГУ-ын бүтээгдэхүүнийг энэ хэсэгт авч болохгүй.Олшруулах урвалжуудыг хөлдөөгчид (эсвэл үйлдвэрлэгчийн зөвлөмжийн дагуу хөргөгчинд) ижил зориулалтын зайд, хамгийн тохиромжтой нь ламинар урсгалын кабинет эсвэл ПГУ-ын өмнөх талбайн хажууд хадгална.ПГУ-ын өмнөх хэсэг эсвэл ламинар урсгалын кабинет руу орох бүрт бээлий солих хэрэгтэй.

ПГУ-ын өмнөх хэсэг буюу ламинар урсгалын шүүгээг хэрэглэхийн өмнө болон дараа дараах байдлаар цэвэрлэнэ: Шүүгээнд байгаа бүх зүйлийг, жишээлбэл, пипетк, хошууны хайрцаг, эргүүлэг, центрифуг, хоолойн тавиур, үзэг гэх мэтийг 70% этилийн спиртээр арчина. арилжааны ДНХ-г устгадаг ариутгагч бодис, хатаана.Ламинар шүүгээ гэх мэт хаалттай ажлын талбайн хувьд бүрээсийг хэт ягаан туяанд 30 минут байлгана.

Анхаарна уу

Урвалжийг хэт ягаан туяанд оруулахгүй байх;Зөвхөн цэвэр болсны дараа тэдгээрийг шүүгээнд шилжүүлээрэй.Хэрэв урвуу транскрипцийн ПГУ-ыг хийж байгаа бол гадаргуу болон тоног төхөөрөмжийг RNases-ийг шүргэх үед задалдаг уусмалаар арчих нь бас тустай.Энэ нь РНХ-ийн ферментийн задралаас үүдэлтэй хуурамч сөрөг үр дүнгээс зайлсхийхэд тусална.Халдваргүйжүүлэлт хийсний дараа болон мастер хольцыг бэлтгэхийн өмнө бээлий дахин солигдох ёстой бөгөөд дараа нь шүүгээ ашиглахад бэлэн болно.

Урьдчилан ПГУ: Нуклейн хүчлийн олборлолт/загвар нэмэх:

Тусдаа пипетк, шүүлтүүрийн үзүүр, хоолойн тавиур, шинэхэн бээлий, лабораторийн дээл болон бусад тоног төхөөрөмжийг ашиглан нуклейн хүчлийг ялган авч, тусгай зориулалтын талбайд боловсруулах ёстой. Энэ хэсэг нь мөн загвар, хяналт, чиг хандлагын шугамыг нэмэхэд зориулагдсан. mastermix хоолой эсвэл хавтан.Шинжилгээнд хамрагдсан нуклейн хүчлийн дээжийг бохирдуулахгүйн тулд эерэг хяналт эсвэл стандарттай харьцахаас өмнө бээлий сольж, тусдаа соруур хэрэглэхийг зөвлөж байна.ПГУ-ын урвалжууд болон олшруулсан бүтээгдэхүүнийг энэ хэсэгт соруулж болохгүй.Дээжийг зориулалтын хөргөгч эсвэл хөлдөөгчид нэг газар хадгална.Дээжийн ажлын талбарыг мастер хольцын зайтай адилаар цэвэрлэнэ.

ПГУ-ын дараах: Олшруулсан бүтээгдэхүүнийг олшруулах, боловсруулах

Энэхүү зориулалтын зай нь олшруулалтын дараах процессуудад зориулагдсан бөгөөд ПГУ-ын өмнөх хэсгүүдээс бие махбодийн хувьд тусдаа байх ёстой.Энэ нь ихэвчлэн термоцикл болон бодит цагийн платформуудыг агуулдаг бөгөөд хэрэв үүрлэсэн ПГУ хийж байгаа бол 2-р шатны урвалд 1-р дугуй ПГУ-ын бүтээгдэхүүнийг нэмэхэд зориулсан ламинар урсгалын кабинеттай байх нь зүйтэй.ПГУ-ын урвалжууд болон олборлосон нуклейн хүчил нь бохирдох эрсдэл өндөр тул энэ газарт ажиллах ёсгүй.Энэ хэсэгт бээлий, лабораторийн цув, хавтан ба хоолойн тавиур, пипетк, шүүлтүүрийн үзүүр, хогийн сав болон бусад тоног төхөөрөмж тусад нь байх ёстой.Хоолойг нээхээс өмнө центрифуг хийх шаардлагатай.Дээжийн ажлын талбарыг мастер хольцын зайтай адилаар цэвэрлэнэ.

ПГУ-ын дараах: Бүтээгдэхүүний шинжилгээ

Энэ өрөөнд бүтээгдэхүүн илрүүлэх төхөөрөмж, тухайлбал гель электрофорезийн сав, тэжээлийн багц, хэт ягаан туяаны дамжуулагч, гель баримтжуулалтын систем зэрэгт зориулагдсан.Энэ хэсэгт бээлий, лабораторийн цув, хавтан ба хоолойн тавиур, пипетк, шүүлтүүрийн үзүүр, хогийн сав болон бусад тоног төхөөрөмж тус тусад нь байх ёстой.Ачаалах будаг, молекул маркер, агароз гель, буферийн бүрэлдэхүүн хэсгүүдээс бусад урвалжуудыг энэ хэсэгт оруулах боломжгүй.Дээжийн ажлын талбарыг мастер хольцын зайтай адилаар цэвэрлэнэ.

Чухал тэмдэглэл

Хэрэв ПГУ-ын дараах өрөөнүүдэд ажил хийгдэж дууссан бол тухайн өдөртөө ПГУ-ын өмнөх өрөөг оруулахгүй байх нь зүйтэй.Хэрэв энэ нь бүрэн зайлсхийх боломжгүй бол эхлээд гараа сайтар угааж, өрөөнд тусгай лабораторийн дээл өмссөн эсэхийг шалгаарай.Лабораторийн ном, бичиг баримтыг ПГУ-ын дараах өрөөнд ашиглаж байсан бол ПГУ-ын өмнөх өрөөнд оруулахгүй байх;шаардлагатай бол протокол/түүний ID гэх мэтийн давхардсан хуулбарыг авна уу.

4. Молекул биологийн ерөнхий зөвлөгөө

Шинжилгээг саатуулахгүйн тулд нунтаггүй бээлий хэрэглээрэй.Бохирдлыг бууруулахын тулд соруурыг зөв хийх нь чухал юм.Буруу соруулснаар шингэн асгах үед ус цацаж, аэрозол үүсэх боломжтой.Зөв соруур хийх сайн туршлагыг дараах холбоосоос олж болно: Гилсоны соруур хийх заавар, Анахимийн соруур хийх техникийн видео, Хоолойг нээхээс өмнө центрифуг хийж, цацахаас сэргийлж болгоомжтой нээнэ үү.Бохирдуулагч бодис оруулахгүйн тулд хоолойг хэрэглэсний дараа шууд хаа.

Олон урвал явуулахдаа урвалж дамжуулалтын тоог багасгаж, бохирдох аюулыг багасгахын тулд нийтлэг урвалж (жишээ нь ус, dNTP, буфер, праймер, фермент) агуулсан нэг мастер хольц бэлтгэнэ.Мастер хольцыг мөсөн эсвэл хүйтэн блок дээр хийхийг зөвлөж байна.Халуун эхлүүлэх ферментийн хэрэглээ нь өвөрмөц бус бүтээгдэхүүний үйлдвэрлэлийг бууруулахад тусална.Флюресцент датчик агуулсан урвалжийг доройтуулахгүйн тулд гэрлээс хамгаална.

5. Дотоод хяналт

Бүх урвалд загваргүй хяналт, тоон урвалын олон цэгт титрлэгдсэн тренд шугамын хамт сайн тодорхойлсон, батлагдсан эерэг ба сөрөг хяналтуудыг оруулна.Эерэг хяналт нь бохирдох эрсдэлтэй тул хүчтэй байх ёсгүй.Нуклейн хүчлийн олборлолт хийхдээ эерэг ба сөрөг хандалтын хяналтыг оруулна.

Хэрэглэгчид ёс зүйн дүрмийн талаар мэдлэгтэй байхын тулд тус бүр дээр тодорхой зааврыг байрлуулахыг зөвлөж байна.Эмнэлзүйн дээжинд ДНХ эсвэл РНХ-ийн маш бага түвшинг илрүүлдэг оношлогооны лабораториуд ПГУ-ын өмнөх өрөөнд бага зэрэг эерэг агаарын даралттай, ПГУ-ын дараах өрөөнд бага зэрэг сөрөг агаарын даралттай тусдаа агааржуулалтын системтэй байх нэмэлт аюулгүй байдлын арга хэмжээ авахыг хүсч болно.

Эцэст нь чанарын баталгаажуулалтын төлөвлөгөөг боловсруулах нь тустай.Ийм төлөвлөгөөнд урвалжийн үндсэн нөөц ба ажлын нөөцийн жагсаалт, иж бүрдэл, урвалж хадгалах дүрэм, хяналтын үр дүнг тайлагнах, ажилтнуудын сургалтын хөтөлбөр, алдааг олж засварлах алгоритм, шаардлагатай үед арилгах арга хэмжээг багтаасан байх ёстой.

6. Ном зүй

Aslan A, Kinzelman J, Dreelin E, Anan'eva T, Lavander J. Бүлэг 3: qPCR лаборатори байгуулах.USEPA qPCR аргыг ашиглан амралт зугаалгын усыг турших удирдамжийн баримт бичиг 1611. Lansing- Michigan State University.

Английн Нийгмийн эрүүл мэнд, NHS.Микробиологийн судалгааны Их Британийн стандартууд: Молекулын олшруулалтын шинжилгээ хийх лабораторийн сайн туршлага).Чанарын удирдамж.2013;4(4):1–15.

Миффлин Т. ПГУ-ын лаборатори байгуулах.Хүйтэн хаврын харбын протокол.2007;7.

Schroeder S 2013. Центрифугуудын байнгын засвар үйлчилгээ: центрифуг, ротор, адаптеруудыг цэвэрлэх, засвар үйлчилгээ хийх, халдваргүйжүүлэх (Цагаан цаас № 14).Гамбург: Эпендорф;2013 он.

Viana RV, Wallis CL.Оношлогооны лабораторид ашигладаг молекулын шинжилгээнд зориулсан Клиникийн Сайн Лабораторийн Практик (GCLP), In: Akyar I, редактор.Чанарын хяналтын өргөн хүрээтэй.Риека, Хорват: Intech;2011: 29–52.