ວິທີການກວດຫາໂມເລກຸນມີຄວາມສາມາດຜະລິດປະລິມານຂະຫນາດໃຫຍ່ຂອງອາຊິດ nucleic ໂດຍຜ່ານການຂະຫຍາຍຂອງປະລິມານການຕິດຕາມທີ່ພົບເຫັນຢູ່ໃນຕົວຢ່າງ.ໃນຂະນະທີ່ນີ້ແມ່ນເປັນປະໂຫຍດສໍາລັບການເຮັດໃຫ້ການກວດພົບທີ່ລະອຽດອ່ອນ, ມັນຍັງແນະນໍາຄວາມເປັນໄປໄດ້ຂອງການປົນເປື້ອນໂດຍຜ່ານການແຜ່ກະຈາຍຂອງ aerosols amplification ໃນສະພາບແວດລ້ອມຫ້ອງທົດລອງ.ໃນເວລາທີ່ດໍາເນີນການທົດລອງ, ສາມາດປະຕິບັດມາດຕະການເພື່ອຫຼີກເວັ້ນການປົນເປື້ອນຂອງ reagents, ອຸປະກອນຫ້ອງທົດລອງແລະ bench, ເນື່ອງຈາກວ່າການປົນເປື້ອນດັ່ງກ່າວອາດຈະສ້າງ false-positive (ຫຼື false-negative).

ເພື່ອຊ່ວຍຫຼຸດຜ່ອນຄວາມເປັນໄປໄດ້ຂອງການປົນເປື້ອນ, ການປະຕິບັດຫ້ອງທົດລອງທີ່ດີຄວນໄດ້ຮັບການປະຕິບັດຕະຫຼອດເວລາ.ໂດຍສະເພາະ, ຄວນລະມັດລະວັງກ່ຽວກັບຈຸດຕໍ່ໄປນີ້:

1. ການຈັດການ reagents
2. ການຈັດຕັ້ງບ່ອນເຮັດວຽກ ແລະ ອຸປະກອນ
3. ການນໍາໃຊ້ແລະການທໍາຄວາມສະອາດຄໍາແນະນໍາສໍາລັບພື້ນທີ່ໂມເລກຸນທີ່ກໍານົດໄວ້
4. ຄໍາແນະນໍາກ່ຽວກັບຊີວະວິທະຍາໂມເລກຸນທົ່ວໄປ
5. ການຄວບຄຸມພາຍໃນ
6. ບັນນານຸກົມ

1. ການຈັດການ reagents

ທໍ່ centrifuge reagent ສັ້ນໆກ່ອນທີ່ຈະເປີດເພື່ອຫຼີກເວັ້ນການຜະລິດ aerosols.Aliquot reagents ເພື່ອຫຼີກເວັ້ນການ freeze-taws ຫຼາຍແລະການປົນເປື້ອນຂອງຫຼັກຊັບຕົ້ນສະບັບ.ຕິດປ້າຍກຳກັບ ແລະ ກຳນົດວັນທີຂອງທໍ່ທາດ reagent ແລະ ຕິກິຣິຍາທັງໝົດຢ່າງຈະແຈ້ງ ແລະ ຮັກສາບັນທຶກຂອງ reagent lot ແລະ batch number ທີ່ໃຊ້ໃນການທົດລອງທັງໝົດ.Pipette ທັງຫມົດ reagents ແລະຕົວຢ່າງການນໍາໃຊ້ຄໍາແນະນໍາການກັ່ນຕອງ.ກ່ອນທີ່ຈະຊື້, ຄວນຢືນຢັນກັບຜູ້ຜະລິດວ່າຄໍາແນະນໍາການກັ່ນຕອງເຫມາະກັບຍີ່ຫໍ້ pipette ທີ່ຈະນໍາໃຊ້.

2. ການຈັດຕັ້ງບ່ອນເຮັດວຽກ ແລະ ອຸປະກອນ

ພື້ນທີ່ເຮັດວຽກຄວນໄດ້ຮັບການຈັດຕັ້ງເພື່ອຮັບປະກັນວ່າການໄຫຼຂອງການເຮັດວຽກເກີດຂື້ນໃນທິດທາງດຽວ, ຈາກພື້ນທີ່ສະອາດ (ກ່ອນ PCR) ໄປຫາພື້ນທີ່ເປື້ອນ (ຫຼັງ PCR).ການລະມັດລະວັງທົ່ວໄປຕໍ່ໄປນີ້ຈະຊ່ວຍຫຼຸດຜ່ອນໂອກາດຂອງການປົນເປື້ອນ.ມີຫ້ອງທີ່ກໍານົດໄວ້ແຍກຕ່າງຫາກ, ຫຼືຢູ່ໃນຂັ້ນຕ່ໍາຂອງພື້ນທີ່ແຍກຕ່າງຫາກທາງດ້ານຮ່າງກາຍ, ສໍາລັບ: ການກະກຽມ mastermix, ການສະກັດເອົາອາຊິດ nucleic ແລະການເພີ່ມແມ່ແບບ DNA, ການຂະຫຍາຍແລະການຈັດການຜະລິດຕະພັນຂະຫຍາຍໃຫຍ່ຂື້ນ, ແລະການວິເຄາະຜະລິດຕະພັນ, ເຊັ່ນ: gel electrophoresis.

ໃນບາງການຕັ້ງຄ່າ, ການມີ 4 ຫ້ອງແຍກຕ່າງຫາກແມ່ນມີຄວາມຫຍຸ້ງຍາກ.ທາງ​ເລືອກ​ທີ່​ເປັນ​ໄປ​ໄດ້​ແຕ່​ຄວາມ​ປາ​ຖະ​ຫນາ​ຫນ້ອຍ​ແມ່ນ​ການ​ກະ​ກຽມ mastermix ໃນ​ພື້ນ​ທີ່​ການ​ບັນ​ຈຸ​, ເຊັ່ນ​: ຕູ້​ການ​ໄຫຼ laminar​.ໃນກໍລະນີຂອງການຂະຫຍາຍ PCR ທີ່ຖືກຮັງ, ການກະກຽມ mastermix ສໍາລັບຕິກິຣິຍາຮອບທີສອງຄວນໄດ້ຮັບການກະກຽມໃນພື້ນທີ່ 'ສະອາດ' ສໍາລັບການກະກຽມ mastermix, ແຕ່ການ inoculation ກັບຜະລິດຕະພັນ PCR ຕົ້ນຕໍຄວນຈະເຮັດຢູ່ໃນຫ້ອງຂະຫຍາຍ, ແລະຖ້າເປັນໄປໄດ້. ຢູ່ໃນພື້ນທີ່ບັນຈຸສະເພາະ (ຕົວຢ່າງ: ຕູ້ໄຫຼ laminar).

ແຕ່ລະຫ້ອງ / ພື້ນທີ່ຕ້ອງການຊຸດທໍ່ທີ່ຕິດສະຫຼາກຢ່າງຈະແຈ້ງ, ຄໍາແນະນໍາການກັ່ນຕອງ, ທໍ່ທໍ່, vortexes, centrifuges (ຖ້າກ່ຽວຂ້ອງ), ປາກກາ, ເຄື່ອງສໍາອາງຫ້ອງທົດລອງທົ່ວໄປ, ເປືອກຫຸ້ມນອກຫ້ອງທົດລອງແລະກ່ອງຖົງມືທີ່ຈະຍັງຄົງຢູ່ໃນບ່ອນເຮັດວຽກຂອງພວກເຂົາ.ຕ້ອງລ້າງມື ແລະ ຖົງມື ແລະເສື້ອຄຸມຫ້ອງທົດລອງປ່ຽນເມື່ອເຄື່ອນຍ້າຍລະຫວ່າງພື້ນທີ່ທີ່ກຳນົດໄວ້.ທາດປະສົມ ແລະ ອຸປະກອນບໍ່ຄວນຖືກຍ້າຍຈາກພື້ນທີ່ເປື້ອນໄປຫາພື້ນທີ່ສະອາດ.ຖ້າກໍລະນີທີ່ຮຸນແຮງເກີດຂື້ນບ່ອນທີ່ reagent ຫຼືຊິ້ນສ່ວນຂອງອຸປະກອນຕ້ອງໄດ້ຮັບການຍ້າຍກັບຄືນໄປບ່ອນ, ມັນທໍາອິດຕ້ອງໄດ້ຮັບການປົນເປື້ອນດ້ວຍ 10% sodium hypochlorite, ຕາມດ້ວຍເຊັດດ້ວຍນ້ໍາທີ່ບໍ່ສະອາດ.

ຫມາຍ​ເຫດ​

ການແກ້ໄຂ sodium hypochlorite 10% ຕ້ອງໄດ້ຮັບການຜະລິດສົດປະຈໍາວັນ.ເມື່ອໃຊ້ສໍາລັບການປົນເປື້ອນ, ເວລາຕິດຕໍ່ຕໍາ່ສຸດທີ່ 10 ນາທີຄວນໄດ້ຮັບການຍຶດຕິດກັບ.
ອີກທາງເລືອກ, ຜະລິດຕະພັນທີ່ມີຢູ່ໃນການຄ້າທີ່ໄດ້ຮັບການຮັບຮອງວ່າເປັນສານປົນເປື້ອນພື້ນຜິວທີ່ທໍາລາຍ DNA ສາມາດນໍາໃຊ້ໄດ້ຖ້າຄໍາແນະນໍາດ້ານຄວາມປອດໄພໃນທ້ອງຖິ່ນບໍ່ອະນຸຍາດໃຫ້ໃຊ້ sodium hypochlorite ຫຼືຖ້າ sodium hypochlorite ບໍ່ເຫມາະສົມສໍາລັບການປົນເປື້ອນຊິ້ນສ່ວນໂລຫະຂອງອຸປະກອນ.

ໂດຍຫລັກການແລ້ວ, ພະນັກງານຄວນປະຕິບັດຕາມ ethos ການໄຫຼວຽນຂອງການເຮັດວຽກ unidirectional ແລະບໍ່ໄປຈາກພື້ນທີ່ເປື້ອນ (post-PCR) ກັບຄືນໄປບ່ອນພື້ນທີ່ສະອາດ (pre-PCR) ໃນມື້ດຽວກັນ.ຢ່າງໃດກໍຕາມ, ມັນອາດຈະມີບາງໂອກາດໃນເວລາທີ່ນີ້ເປັນໄປບໍ່ໄດ້.ເມື່ອມີໂອກາດດັ່ງກ່າວ, ບຸກຄະລາກອນຕ້ອງດູແລລ້າງມືຢ່າງສະອາດ, ປ່ຽນຖົງມື, ໃຊ້ເສື້ອຄຸມຫ້ອງທົດລອງ ແລະ ບໍ່ໃຫ້ແນະນຳອຸປະກອນທີ່ເຂົາເຈົ້າຢາກເອົາອອກຈາກຫ້ອງອີກ ເຊັ່ນ: ປຶ້ມຫ້ອງທົດລອງ.ມາດຕະການຄວບຄຸມດັ່ງກ່າວຄວນໄດ້ຮັບການເນັ້ນຫນັກໃນການຝຶກອົບຮົມພະນັກງານກ່ຽວກັບວິທີການໂມເລກຸນ.

ຫຼັງ​ຈາກ​ການ​ນໍາ​ໃຊ້​, ສະ​ຖານ​ທີ່ bench ຄວນ​ຈະ​ໄດ້​ຮັບ​ການ​ອະ​ນາ​ໄມ​ດ້ວຍ 10% sodium hypochlorite (ປະ​ຕິ​ບັດ​ດ້ວຍ​ນ​້​ໍ​າ​ອະ​ມັນ​ເພື່ອ​ເອົາ​ສານ​ຟອກ​ຕົກ​ຄ້າງ​, 70​% ເອ​ທາ​ນອນ​, ຫຼື​ມີ​ການ​ຜະ​ລິດ​ທີ່​ມີ​ການ​ກວດ​ສອບ​ສານ​ພິດ​ທໍາ​ລາຍ DNA​.ໂດຍວິທີທາງການ, ໂຄມໄຟ ultra-violet (UV) ຄວນຖືກຕິດຕັ້ງເພື່ອໃຫ້ການປົນເປື້ອນໂດຍການ irradiation.ຢ່າງໃດກໍ່ຕາມ, ການນໍາໃຊ້ໂຄມໄຟ UV ຄວນຖືກຈໍາກັດຢູ່ໃນພື້ນທີ່ເຮັດວຽກທີ່ປິດ, ເຊັ່ນ: ຕູ້ນິລະໄພ, ເພື່ອຈໍາກັດການສໍາຜັດ UV ຂອງພະນັກງານຫ້ອງທົດລອງ.ກະລຸນາປະຕິບັດຕາມຄໍາແນະນໍາຜູ້ຜະລິດສໍາລັບການດູແລໂຄມໄຟ UV, ການລະບາຍອາກາດແລະການທໍາຄວາມສະອາດເພື່ອຮັບປະກັນວ່າໂຄມໄຟຍັງຄົງມີປະສິດທິພາບ.

ຖ້າໃຊ້ 70% ethanol ແທນ sodium hypochlorite, ການ irradiation ກັບແສງ UV ຈະມີຄວາມຈໍາເປັນເພື່ອເຮັດໃຫ້ການປົນເປື້ອນສໍາເລັດ.
ຢ່າເຮັດຄວາມສະອາດ vortex ແລະ centrifuge ດ້ວຍ sodium hypochlorite;ແທນທີ່ຈະ, ເຊັດດ້ວຍ 70% ethanol ແລະເປີດເຜີຍໃຫ້ເຫັນກັບແສງ UV, ຫຼືໃຊ້ສານປົນເປື້ອນ DNA ທີ່ເປັນການຄ້າ.ສໍາລັບການຮົ່ວໄຫຼ, ໃຫ້ກວດເບິ່ງກັບຜູ້ຜະລິດສໍາລັບຄໍາແນະນໍາການເຮັດຄວາມສະອາດຕື່ມອີກ.ຖ້າຄໍາແນະນໍາຂອງຜູ້ຜະລິດອະນຸຍາດໃຫ້ມັນ, pipettes ຄວນໄດ້ຮັບການຂ້າເຊື້ອເປັນປົກກະຕິໂດຍ autoclave.ຖ້າ pipettes ບໍ່ສາມາດ autoclaved ໄດ້, ມັນຄວນຈະພຽງພໍທີ່ຈະທໍາຄວາມສະອາດພວກມັນດ້ວຍ 10% sodium hypochlorite (ປະຕິບັດຕາມໂດຍການເຊັດໃຫ້ສະອາດດ້ວຍນ້ໍາຫມັນ) ຫຼືດ້ວຍສານ decontaminant ທີ່ທໍາລາຍ DNA ທາງດ້ານການຄ້າຕາມດ້ວຍການສໍາຜັດກັບ UV.

ການເຮັດຄວາມສະອາດດ້ວຍໂຊດຽມ hypochlorite ອັດຕາສ່ວນສູງອາດຈະທໍາລາຍພາດສະຕິກ pipette ແລະໂລຫະໃນທີ່ສຸດຖ້າເຮັດເປັນປະຈໍາ;ກວດເບິ່ງຄໍາແນະນໍາຈາກຜູ້ຜະລິດກ່ອນ.ອຸປະກອນທັງຫມົດຕ້ອງໄດ້ຮັບການປັບເປັນປົກກະຕິຕາມຕາຕະລາງທີ່ຜູ້ຜະລິດແນະນໍາ.ບຸກຄົນທີ່ຖືກແຕ່ງຕັ້ງຄວນຮັບຜິດຊອບໃນການຮັບປະກັນວ່າຕາຕະລາງການສອບທຽບໄດ້ຖືກປະຕິບັດຕາມ, ບັນທຶກລາຍລະອຽດຖືກຮັກສາໄວ້, ແລະປ້າຍບໍລິການຖືກສະແດງຢ່າງຊັດເຈນໃນອຸປະກອນ.

3. ການນໍາໃຊ້ແລະການທໍາຄວາມສະອາດຄໍາແນະນໍາສໍາລັບພື້ນທີ່ໂມເລກຸນທີ່ກໍານົດໄວ້

Pre-PCR: Reagent aliquoting / mastermix ການກະກຽມ: ນີ້ຄວນຈະເປັນທີ່ສະອາດທີ່ສຸດຂອງພື້ນທີ່ທັງຫມົດທີ່ໃຊ້ສໍາລັບການກະກຽມການທົດລອງໂມເລກຸນແລະໂດຍສະເພາະຄວນຈະເປັນຕູ້ໄຫຼ laminar ທີ່ກໍານົດໄວ້ໂດຍມີແສງ UV.ຕົວຢ່າງ, ອາຊິດນິວຄລີອິກທີ່ສະກັດອອກແລະຜະລິດຕະພັນ PCR ຂະຫຍາຍໃຫຍ່ຂື້ນຕ້ອງບໍ່ໄດ້ຮັບການປະຕິບັດໃນພື້ນທີ່ນີ້.ທາດປະສົມການຂະຫຍາຍຄວນເກັບຮັກສາໄວ້ໃນຕູ້ແຊ່ເຢັນ (ຫຼືຕູ້ເຢັນ, ຕາມຄໍາແນະນໍາຂອງຜູ້ຜະລິດ) ໃນພື້ນທີ່ທີ່ກໍານົດໄວ້ດຽວກັນ, ເຫມາະສົມທີ່ສຸດຢູ່ໃກ້ກັບຕູ້ນ້ໍາ laminar ຫຼືພື້ນທີ່ pre-PCR.ຖົງມືຄວນໄດ້ຮັບການປ່ຽນແຕ່ລະຄັ້ງເມື່ອເຂົ້າໄປໃນພື້ນທີ່ກ່ອນ PCR ຫຼືຫ້ອງນ້ໍາ laminar.

ພື້ນທີ່ pre-PCR ຫຼືຕູ້ laminar flow ຄວນໄດ້ຮັບການອະນາໄມກ່ອນແລະຫຼັງການນໍາໃຊ້ດັ່ງຕໍ່ໄປນີ້: ເຊັດລົງລາຍການລາຍການທັງຫມົດໃນຕູ້, ເຊັ່ນ pipettes, tip boxes, vortex, centrifuge, racks tube, pens, ແລະອື່ນໆທີ່ມີ 70% ethanol ຫຼື a. ທາດປົນເປື້ອນທີ່ທໍາລາຍ DNA ທາງດ້ານການຄ້າ, ແລະອະນຸຍາດໃຫ້ແຫ້ງ.ໃນ​ກໍ​ລະ​ນີ​ຂອງ​ພື້ນ​ທີ່​ການ​ເຮັດ​ວຽກ​ທີ່​ປິດ​, ເຊັ່ນ​: ຕູ້​ໄຫຼ laminar​, expose hood ກັບ​ແສງ UV ສໍາ​ລັບ 30 ນາ​ທີ​.

ຫມາຍ​ເຫດ​

ບໍ່ exposing reagents ກັບແສງ UV;ພຽງແຕ່ຍ້າຍພວກມັນເຂົ້າໄປໃນຕູ້ເມື່ອມັນສະອາດ.ຖ້າປະຕິບັດ PCR reverse transcription, ມັນອາດຈະເປັນປະໂຫຍດທີ່ຈະເຊັດພື້ນຜິວແລະອຸປະກອນທີ່ມີການແກ້ໄຂທີ່ທໍາລາຍ RNases ກ່ຽວກັບການຕິດຕໍ່.ນີ້ອາດຈະຊ່ວຍຫຼີກເວັ້ນຜົນໄດ້ຮັບທີ່ບໍ່ຖືກຕ້ອງຈາກການທໍາລາຍ enzyme ຂອງ RNA.ຫຼັງຈາກການປົນເປື້ອນແລະກ່ອນທີ່ຈະກະກຽມ mastermix, ຖົງມືຄວນໄດ້ຮັບການປ່ຽນອີກເທື່ອຫນຶ່ງ, ແລະຫຼັງຈາກນັ້ນຕູ້ແມ່ນພ້ອມທີ່ຈະໃຊ້.

Pre-PCR: ການສະກັດເອົາອາຊິດນິວຄລີອິກ / ການເພີ່ມແມ່ແບບ:

ອາຊິດນິວຄລີອິກຕ້ອງໄດ້ຮັບການສະກັດແລະຈັດການໃນພື້ນທີ່ກໍານົດທີສອງ, ໂດຍໃຊ້ທໍ່ທໍ່ແຍກຕ່າງຫາກ, ຄໍາແນະນໍາການກັ່ນຕອງ, ຊັ້ນວາງທໍ່, ຖົງມືສົດ, ເປືອກຫຸ້ມນອກຫ້ອງທົດລອງແລະອຸປະກອນອື່ນໆ. ພື້ນທີ່ນີ້ແມ່ນສໍາລັບການເພີ່ມແມ່ແບບ, ການຄວບຄຸມແລະເສັ້ນແນວໂນ້ມ. ທໍ່ mastermix ຫຼືແຜ່ນ.ເພື່ອຫຼີກເວັ້ນການປົນເປື້ອນຂອງຕົວຢ່າງອາຊິດນິວຄລີອິກທີ່ສະກັດອອກມາທີ່ກໍາລັງຖືກວິເຄາະ, ແນະນໍາໃຫ້ປ່ຽນຖົງມືກ່ອນທີ່ຈະຈັດການການຄວບຄຸມຫຼືມາດຕະຖານໃນທາງບວກແລະນໍາໃຊ້ຊຸດ pipettes ແຍກຕ່າງຫາກ.ສານເຄມີ PCR ແລະຜະລິດຕະພັນຂະຫຍາຍພັນຈະຕ້ອງບໍ່ຖືກທໍ່ຢູ່ໃນພື້ນທີ່ນີ້.ຕົວຢ່າງຄວນຖືກເກັບໄວ້ໃນຕູ້ເຢັນທີ່ກໍານົດຫຼືຕູ້ເຢັນໃນພື້ນທີ່ດຽວກັນ.ພື້ນທີ່ເຮັດວຽກຕົວຢ່າງຄວນຖືກອະນາໄມໃນແບບດຽວກັນກັບພື້ນທີ່ mastermix.

Post-PCR: ການຂະຫຍາຍແລະການຈັດການຜະລິດຕະພັນຂະຫຍາຍໃຫຍ່ຂື້ນ

ພື້ນທີ່ທີ່ກໍານົດນີ້ແມ່ນສໍາລັບຂະບວນການຫລັງການຂະຫຍາຍແລະຄວນຈະແຍກອອກຈາກພື້ນທີ່ກ່ອນ PCR.ປົກກະຕິແລ້ວມັນປະກອບດ້ວຍເຄື່ອງຄວບຄຸມອຸນຫະພູມແລະເວທີທີ່ໃຊ້ເວລາທີ່ແທ້ຈິງ, ແລະໂດຍສະເພາະຄວນຈະມີຕູ້ໄຫຼ laminar ສໍາລັບການເພີ່ມຜະລິດຕະພັນ PCR ຮອບ 1 ຮອບ 2 ປະຕິກິລິຍາ, ຖ້າຫາກວ່າ PCR ຮັງໄດ້ຖືກປະຕິບັດ.ສານເຄມີ PCR ແລະອາຊິດນິວຄລີອິກທີ່ສະກັດອອກຈະຕ້ອງບໍ່ຖືກຈັດການຢູ່ໃນພື້ນທີ່ນີ້ເພາະວ່າຄວາມສ່ຽງຕໍ່ການປົນເປື້ອນແມ່ນສູງ.ພື້ນທີ່ນີ້ຄວນມີຖົງມືແຍກຕ່າງຫາກ, ເປືອກຫຸ້ມນອກຫ້ອງທົດລອງ, ຊັ້ນວາງແລະທໍ່, ທໍ່ທໍ່, ຄໍາແນະນໍາການກັ່ນຕອງ, ຖັງຂີ້ເຫຍື້ອແລະອຸປະກອນອື່ນໆ.ທໍ່ຕ້ອງຖືກຈຸດສູນກາງກ່ອນທີ່ຈະເປີດ.ພື້ນທີ່ເຮັດວຽກຕົວຢ່າງຄວນຖືກອະນາໄມໃນແບບດຽວກັນກັບພື້ນທີ່ mastermix.

Post-PCR: ການວິເຄາະຜະລິດຕະພັນ

ຫ້ອງນີ້ແມ່ນສໍາລັບອຸປະກອນການກວດສອບຜະລິດຕະພັນ, ເຊັ່ນ: ຖັງ electrophoresis gel, ຊຸດພະລັງງານ, transilluminator UV ແລະລະບົບເອກະສານ gel.ພື້ນທີ່ນີ້ຄວນຈະມີຖົງມືແຍກຕ່າງຫາກ, ເປືອກຫຸ້ມນອກຫ້ອງທົດລອງ, ຊັ້ນວາງແລະທໍ່, ທໍ່ທໍ່, ຄໍາແນະນໍາການກັ່ນຕອງ, ຖັງຂີ້ເຫຍື້ອແລະອຸປະກອນອື່ນໆ.ບໍ່ມີສານຕ້ານອະນຸມູນອິດສະລະອື່ນສາມາດຖືກນໍາເຂົ້າມາໃນພື້ນທີ່ນີ້, ບໍ່ລວມເອົາສີຍ້ອມຜ້າ, ເຄື່ອງໝາຍໂມເລກຸນ ແລະ ເຈນ agarose, ແລະສ່ວນປະກອບຂອງສານກັນບູດ.ພື້ນທີ່ເຮັດວຽກຕົວຢ່າງຄວນຖືກອະນາໄມໃນແບບດຽວກັນກັບພື້ນທີ່ mastermix.

ຫມາຍເຫດສໍາຄັນ

ໂດຍວິທີທາງການ, ຫ້ອງກ່ອນ PCR ບໍ່ຄວນເຂົ້າໄປໃນຫ້ອງດຽວກັນຖ້າການເຮັດວຽກໄດ້ຖືກປະຕິບັດແລ້ວໃນຫ້ອງຫຼັງ PCR.ຖ້າອັນນີ້ຫຼີກລ່ຽງບໍ່ໄດ້, ໃຫ້ແນ່ໃຈວ່າລ້າງມືກ່ອນຢ່າງລະອຽດ ແລະໃສ່ເສື້ອຄຸມຫ້ອງທົດລອງສະເພາະໃນຫ້ອງ.ປື້ມຫ້ອງທົດລອງແລະເອກະສານຕ້ອງບໍ່ຖືກເອົາເຂົ້າໄປໃນຫ້ອງກ່ອນ PCR ຖ້າພວກເຂົາຖືກນໍາໃຊ້ໃນຫ້ອງຫລັງ PCR;ຖ້າຈໍາເປັນ, ເອົາການພິມທີ່ຊ້ໍາກັນຂອງໂປໂຕຄອນ / IDs ຕົວຢ່າງ, ແລະອື່ນໆ.

4. ຄໍາແນະນໍາກ່ຽວກັບຊີວະວິທະຍາໂມເລກຸນທົ່ວໄປ

ໃຊ້ຖົງມືທີ່ບໍ່ມີຝຸ່ນເພື່ອຫຼີກເວັ້ນການຍັບຍັ້ງການກວດສອບ.ເຕັກນິກການທໍ່ທໍ່ທີ່ຖືກຕ້ອງແມ່ນສໍາຄັນທີ່ສຸດເພື່ອຫຼຸດຜ່ອນການປົນເປື້ອນ.ທໍ່ທໍ່ທີ່ບໍ່ຖືກຕ້ອງສາມາດສົ່ງຜົນໃຫ້ກະແຈກກະຈາຍໃນເວລາສົ່ງຂອງແຫຼວແລະການສ້າງ aerosols.ການປະຕິບັດທີ່ດີສໍາລັບການທໍ່ທໍ່ທີ່ຖືກຕ້ອງສາມາດພົບໄດ້ຢູ່ໃນການເຊື່ອມຕໍ່ຕໍ່ໄປນີ້: Gilson ຄູ່ມືກ່ຽວກັບການ pipetting, ວິດີໂອເຕັກນິກການທໍ່ທໍ່ Anachem, ທໍ່ centrifuge ກ່ອນທີ່ຈະເປີດ, ແລະເປີດໃຫ້ເຂົາເຈົ້າລະມັດລະວັງເພື່ອຫຼີກເວັ້ນການ splashing.ປິດທໍ່ທັນທີຫຼັງຈາກການນໍາໃຊ້ເພື່ອຫຼີກເວັ້ນການແນະນໍາການປົນເປື້ອນ.

ໃນເວລາທີ່ປະຕິບັດປະຕິກິລິຍາຫຼາຍ, ກະກຽມຫນຶ່ງ mastermix ທີ່ມີ reagents ທົ່ວໄປ (ເຊັ່ນ: ນ້ໍາ, dNTPs, buffer, primers ແລະ enzyme) ເພື່ອຫຼຸດຜ່ອນຈໍານວນຂອງການໂອນ reagent ແລະຫຼຸດຜ່ອນໄພຂົ່ມຂູ່ຂອງການປົນເປື້ອນ.ມັນແນະນໍາໃຫ້ຕັ້ງ mastermix ໃສ່ກ້ອນຫຼືກ້ອນເຢັນ.ການນໍາໃຊ້ enzyme ຂອງ Hot Start ອາດຈະຊ່ວຍຫຼຸດຜ່ອນການຜະລິດຂອງຜະລິດຕະພັນທີ່ບໍ່ສະເພາະ.ປົກປ້ອງ reagents ທີ່ມີ fluorescent probes ຈາກແສງສະຫວ່າງເພື່ອຫຼີກເວັ້ນການຊຸດໂຊມ.

5. ການຄວບຄຸມພາຍໃນ

ລວມເອົາການຄວບຄຸມທາງບວກ ແລະທາງລົບທີ່ມີລັກສະນະດີ, ຢືນຢັນ, ພ້ອມກັບການຄວບຄຸມແບບບໍ່ມີແມ່ແບບໃນປະຕິກິລິຍາທັງໝົດ, ແລະເສັ້ນແນວໂນ້ມການໄຕຣຕ໌ແບບຫຼາຍຈຸດສຳລັບປະຕິກິລິຍາດ້ານປະລິມານ.ການຄວບຄຸມທາງບວກບໍ່ຄວນມີຄວາມເຂັ້ມແຂງດັ່ງນັ້ນມັນເຮັດໃຫ້ເກີດຄວາມສ່ຽງຕໍ່ການປົນເປື້ອນ.ລວມເອົາການຄວບຄຸມການສະກັດເອົາທາງບວກແລະລົບໃນເວລາທີ່ປະຕິບັດການສະກັດເອົາອາຊິດ nucleic.

ແນະນໍາໃຫ້ມີຄໍາແນະນໍາທີ່ຊັດເຈນໃນແຕ່ລະພື້ນທີ່ເພື່ອໃຫ້ຜູ້ໃຊ້ຮູ້ກົດລະບຽບການປະພຶດ.ຫ້ອງທົດລອງວິນິດໄສທີ່ກວດພົບລະດັບ DNA ຫຼື RNA ຕໍ່າຫຼາຍໃນຕົວຢ່າງທາງຄລີນິກອາດຈະຕ້ອງການໃຊ້ມາດຕະການຄວາມປອດໄພເພີ່ມເຕີມຂອງການມີລະບົບການຈັດການທາງອາກາດແຍກຕ່າງຫາກທີ່ມີຄວາມກົດດັນອາກາດໃນທາງບວກເລັກນ້ອຍໃນຫ້ອງກ່ອນ PCR ແລະຄວາມດັນອາກາດທາງລົບເລັກນ້ອຍໃນຫ້ອງຫລັງ PCR.

ສຸດທ້າຍ, ການສ້າງແຜນປະກັນຄຸນນະພາບ (QA) ແມ່ນເປັນປະໂຫຍດ.ແຜນການດັ່ງກ່າວຄວນປະກອບມີບັນຊີລາຍຊື່ຂອງຫຼັກຊັບຕົ້ນສະບັບ reagent ແລະຫຼັກຊັບເຮັດວຽກ, ກົດລະບຽບສໍາລັບການເກັບຮັກສາຊຸດແລະ reagents, ການລາຍງານຜົນຂອງການຄວບຄຸມ, ໂຄງການການຝຶກອົບຮົມພະນັກງານ, ສູດການຄິດໄລ່ບັນຫາ, ແລະການປະຕິບັດການແກ້ໄຂໃນເວລາທີ່ຈໍາເປັນ.

6. ບັນນານຸກົມ

Aslan A, Kinzelman J, Dreelin E, Anan'eva T, Lavander J. ບົດທີ 3: ການຕັ້ງຫ້ອງທົດລອງ qPCR.ເອກະສານແນະນໍາສໍາລັບການທົດສອບນ້ໍາພັກຜ່ອນໂດຍໃຊ້ USEPA qPCR ວິທີການ 1611. Lansing- Michigan State University.

ສາທາລະນະສຸກອັງກິດ, NHS.ມາດຕະຖານຂອງອັງກິດສໍາລັບການສືບສວນຈຸລິນຊີ: ການປະຕິບັດຫ້ອງທົດລອງທີ່ດີໃນເວລາທີ່ປະຕິບັດການກວດສອບການຂະຫຍາຍໂມເລກຸນ).ການແນະນຳຄຸນນະພາບ.2013;4(4:1–15).

Mifflin T. ການຕັ້ງຫ້ອງທົດລອງ PCR.Cold Spring Harb Protoc.2007;7.

Schroeder S 2013. ການບໍາລຸງຮັກສາເຄື່ອງ centrifuges ປົກກະຕິ: ການທໍາຄວາມສະອາດ, ການບໍາລຸງຮັກສາແລະການຂ້າເຊື້ອຂອງ centrifuges, rotors ແລະອະແດບເຕີ (ເຈ້ຍສີຂາວສະບັບເລກທີ 14).Hamburg: Eppendorf;2013.

Viana RV, Wallis CL.ການປະຕິບັດຫ້ອງທົດລອງທາງດ້ານການຊ່ວຍທີ່ດີ (GCLP) ສໍາລັບການທົດສອບໂດຍອີງໃສ່ໂມເລກຸນທີ່ໃຊ້ໃນຫ້ອງທົດລອງວິນິດໄສ, ໃນ: Akyar I, ບັນນາທິການ.ການຄວບຄຸມຄຸນນະພາບຢ່າງກວ້າງຂວາງ.Rijeka, Croatia: ອິນເທກ;2011: 29–52.